?背景有黑點(diǎn)，怎么辦？?詳情信息

C.改變緩沖液，如換為BSA。

使用現(xiàn)配的溶液（Running/transfer/blocking/wash buffers）或商業(yè)化溶液減少因長(zhǎng)菌長(zhǎng)霉造成的黑點(diǎn)。

3、封閉液及抗體交互作用

降低蛋白上樣量，通常蛋白上樣量為30-50ug，但有些蛋白表達(dá)量較高（如β-actin），此時(shí)可依蛋白表達(dá)量，進(jìn)行微調(diào)。

C.于4℃過夜孵育，減少抗體非特異性結(jié)合。

D.全細(xì)胞或亞細(xì)胞萃取，使用商業(yè)化全細(xì)胞或亞細(xì)胞萃取試劑盒提取蛋白樣品，減少配制試劑溶液以及操作中分離不干凈的問題。

B.蛋白變性不完-全，也會(huì)使條帶成團(tuán)拖曳；此時(shí)，可通過延長(zhǎng)樣品加熱時(shí)間(一般約5分鐘)及調(diào)整SDS(一般是2 %)比例，使蛋白變性更完-全。

B.空的泳道加Sample Buffer

避免膠體過熱。電壓過高也會(huì)出現(xiàn)微笑、歪斜條帶等條帶，建議上層濃縮膠使用80V；下層分離膠使用100-120V。另外也需檢查電泳槽是否有銹蝕造成電流不穩(wěn)。過熱時(shí)可改為在冷室或者冰浴中進(jìn)行電泳。

C.封閉時(shí)間增加，一般情況會(huì)使用室溫37度封閉1小時(shí)，可視情況調(diào)整封閉的條件。

C.膜沒有完-全均勻濕透，PVDF膜較會(huì)出現(xiàn)這個(gè)狀況，使用PVDF膜前，需用100% methanol完-全浸潤(rùn)膜。

C.足夠的洗脫時(shí)間和次數(shù)

C.避免反復(fù)凍融樣品（建議分裝）；建議使用新鮮制備的樣品。

2、蛋白形成多聚體

B.樣本煮沸溫度達(dá)到95℃-100℃。

查詢生物信息是否有后修飾、剪切體等。

B.減少上樣量。

B.設(shè)對(duì)照組來確認(rèn)抗體非專一性結(jié)合可能的原因，例如：是否有目標(biāo)蛋白表達(dá)。